การเพาะปลูกจุลินทรีย์

一、การแยกและการเพาะปลูก

จุลินทรีย์มีอยู่ในสภาพผสมในธรรมชาติ เพื่อให้ได้สายพันธุ์ที่ต้องการพวกเขาจะต้องแยกออกจากพวกเขา หากมีการปนเปื้อนโดยบังเอิญเมื่อเก็บรักษาไว้จะต้องทำให้บริสุทธิ์ มีหลายวิธีสำหรับการแยกและการทำให้บริสุทธิ์ของจุลินทรีย์แต่หลักการพื้นฐานมีความคล้ายคลึงกัน นั่นคือตัวอย่างที่จะแยกออกจากกันเจือจางในระดับหนึ่งและเซลล์ (หรือสปอร์) ของจุลินทรีย์จะถูกเก็บไว้ในสภาพที่แยกย้ายกันไปให้มากที่สุด, แล้วพวกเขาก็เติบโตเป็นอาณานิคมเดียวที่บริสุทธิ์ อย่างไรก็ตามงานข้างต้นไม่สามารถแยกออกได้จากกระบวนการฉีดวัคซีนซึ่งคือการถ่ายโอนจุลินทรีย์ไปยังสื่อฆ่าเชื้ออื่น

การจัดหมวดหมู่วัสดุและเครื่องมือ:

ศูนย์บ่มเพาะอุณหภูมิคงที่, แหวน inoculation, แท่งแก้ว, ปิเปต, โคมไฟแอลกอฮอล์, สื่อวัฒนธรรม, e. coli, Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus, ยีสต์ฯลฯ

วิธีการดำเนินงานของ inoculation:

1 .slant inoculation (เชื่อมต่อ Staphylococcus aureus)

ก่อนใช้งานให้เช็ดมือด้วยแอลกอฮอล์75% และจุดไฟแอลกอฮอล์หลังจากแอลกอฮอล์ระเหย จับท่อความเครียดและพื้นผิวเอียงระหว่างนิ้วหัวแม่มือซ้ายและอีกสี่นิ้วเพื่อให้พื้นผิวเอียงและด้านข้างที่มีความเครียดหันหน้าไปทางด้านบนและในตำแหน่งแนวนอน ขั้นแรกให้หมุนความเครียดและผ้าอนามัยแบบสอดของความลาดชันเพื่อให้ง่ายต่อการดึงออกเมื่อเกิดขึ้น ถือแหวน inoculation ไว้ในมือซ้ายของคุณ (เช่นถือปากกา) ฆ่าเชื้อปลายแหวนบนเปลวไฟก่อนแล้วฆ่าเชื้อโดยการขยายเข้าไปในส่วนที่เหลือของหลอดทดสอบ ใช้นิ้วนางนิ้วก้อยและฝ่ามือของคุณเพื่อดึงท่อเชื้อโรคและปลั๊กฝ้ายหรือฝาหลอดทดลองของหลอดทดลองเอียงในเวลาเดียวกันแล้วค่อยๆฆ่าเชื้อปากหลอดทดลอง (อย่าเผาร้อนเกินไป) ขยายแหวน inoculation เผาลงในหลอดเมล็ดติดต่อแหวน inoculation บนผนังด้านในของหลอดทดสอบหรือกลางโดยไม่ต้องมอสให้มันเย็นลงอย่างเพียงพอ, จากนั้นค่อยๆขูดมอสเล็กน้อยแล้วดึงออกจากแหวนฉีดวัคซีนหลอด ขยายวงแหวนที่มีแบคทีเรียเข้าไปในท่อทดสอบอื่นอย่างรวดเร็วเพื่อเชื่อมต่อ ทำให้รูปร่าง "Z" จากด้านล่างของความลาดชันขึ้นและลงอย่างหนาแน่น บางครั้งก็ยังเป็นไปได้ที่จะใช้เข็ม inoculation เพื่อดึงเส้นในศูนย์กลางของขนาดกลางสำหรับการฉีดวัคซีนเฉียงเพื่อที่จะสังเกตลักษณะการเจริญเติบโตของแบคทีเรีย หลังจากการฉีดวัคซีนเสร็จสิ้นวง inoculation จะถูกถอนออกและเสียบปลั๊กฝ้าย ฆ่าเชื้อแหวนฉีดวัคซีน ใส่ลงห่วง inoculation และกระชับปลั๊กฝ้าย

2.การฉีดวัคซีนด้วยของเหลว

เชื่อมต่อสื่อเอียงกับสื่อของเหลว วิธีนี้ใช้เพื่อสังเกตลักษณะการเจริญเติบโตของแบคทีเรียและการวัดปฏิกิริยาทางชีวเคมี วิธีการทำงานเหมือนเดิมแต่ปากหลอดทดสอบเอียงขึ้นเพื่อป้องกันไม่ให้ของเหลววัฒนธรรมไหลออกและเชื่อมต่อแบคทีเรีย, inoculate ถูแหวนและผนังด้านในของหลอดไม่กี่ครั้งเพื่อล้างแบคทีเรียบนแหวน หลังจากการฉีดวัคซีนเสียบปลั๊กฝ้ายและหลอดทดสอบจะถูกเคาะเบาๆในฝ่ามือเพื่อกระจายแบคทีเรียอย่างเต็มที่ Inoculate ของเหลวกลางจากของเหลวกลาง เมื่อความเครียดเป็นของเหลวให้ใช้ปิเปตหรือหยดที่ปราศจากเชื้อนอกเหนือจากแหวน inoculation. เมื่อเกิดขึ้นเพียงดึงปลั๊กฝ้ายที่อยู่ถัดจากเปลวไฟผ่านปากของหลอดผ่านเปลวไฟให้ใช้ปิเปตที่ปราศจากเชื้อเพื่อดูดสารละลายแบคทีเรียลงในสารละลายวัฒนธรรม, และเขย่ามันอย่างสม่ำเสมอ

3.แผ่นรองพื้น

คะแนนและกระจายแบคทีเรียบนแผ่น การ inoculation ข้ามบรรทัดดูวิธีการข้ามบรรทัดแยกต่างหาก การแพร่กระจายและการฉีดวัคซีนฉีดสารละลายแบคทีเรียลงในแผ่นด้วยปิเปตที่ปราศจากเชื้อและเคลือบพื้นผิวของแผ่นอย่างสม่ำเสมอด้วยแท่งแก้วที่ผ่านการฆ่าเชื้อแล้ว

4.การฉีดวัคซีน

Inoculate แบคทีเรียเป็นสื่อวัฒนธรรมลึกของแข็ง วิธีนี้ใช้เพื่อป้องกันแบคทีเรียที่ไม่ใช้ออกซิเจนหรือสังเกตประสิทธิภาพทางสรีรวิทยาเมื่อระบุแบคทีเรีย วิธีการทำงานเหมือนกับด้านบนแต่เข็ม inoculation ที่ใช้ควรตรง เจาะเข็ม inoculation จากศูนย์กลางของสื่อวัฒนธรรมจนกว่าจะอยู่ใกล้กับด้านล่างของหลอดแต่ไม่เจาะและจากนั้นค่อยๆดึงเส้นทางการเจาะเดิมออก

⚝ 、วิธีการดำเนินการแยก:

1.วิธีการแยกเจือจาง

กระจายตัวอย่างที่แยกจากกันให้น้อยที่สุดโดยการเจือจางอย่างต่อเนื่องจากนั้นวาดจำนวนหนึ่งลงในแผ่นและผสมกับสื่อ agar ที่เหมาะสำหรับการหลอมละลายเพื่อให้แบคทีเรียที่กระจายตัวได้รับการแก้ไขในสถานที่เพื่อสร้างอาณานิคมเดียว Escherichia coli หรือยีสต์เตรียมด้วยน้ำเชื้อที่ปราศจากเชื้อเป็นตัวระงับแบคทีเรีย ใช้หลอดทดสอบปลอดเชื้อหลายหลอดโดยแต่ละหลอดมีน้ำปลอดเชื้อ9มล. ปิเปต1มล. ของการระงับแบคทีเรียที่เตรียมไว้และวางไว้ในหลอดทดสอบแรกที่มีน้ำปลอดเชื้อ9มล. เพื่อให้เจือจาง10ครั้งซึ่งเป็น10-2. วาด1มล. จากหลอดทดสอบแรก (10-2) และฉีดลงในหลอดทดสอบที่สองที่มีน้ำปราศจากเชื้อเพื่อให้เจือจาง100ครั้งซึ่งเป็น10-2. ทำงานในลักษณะเดียวกันจนกว่าจะเจือจางถึง10-5-10-6. วาดสารละลายแบคทีเรีย0.2มล. อย่างแม่นยำของการเจือจางแต่ละครั้งที่10-5-10-6และเพิ่มลงในจานปลอดเชื้อที่ไม่มีหมายเลข ทำซ้ำเจือจางเดียวกันเพื่อให้สามจาน เทสื่อ agar ที่ละลายและระบายความร้อนได้ถึง45ลงในแผ่นที่กล่าวถึงข้างต้นแต่ละแผ่นหมุนเบาๆเพื่อผสมสื่อและการระงับแบคทีเรียอย่างละเอียดหลังจากแข็งตัว, วางไว้ในตู้อบ37หรือ38องศาและบ่มเป็นเวลา24-48ชั่วโมงสังเกตการเจริญเติบโตและการกระจายอาณานิคมบนแผ่น

2.วิธีการแยกอาลักษณ์เตียงแบน

วิธีการแยกแนวแผ่นเป็นวิธีการแยกจุลินทรีย์โดยการแบ่งแหวน inoculation บนพื้นผิวของสื่อแผ่นโดยการแบ่งเขต หลักการคือการเจือจางตัวอย่างจุลินทรีย์ "จากจุดหนึ่งไปอีกเส้น" บนพื้นผิวของสื่อที่เป็นของแข็งหลายครั้งเพื่อให้บรรลุวัตถุประสงค์ของการแยก เทแผ่นละลายสารสกัดจากเนื้อวัว peptone agar medium เทแผ่นและปล่อยให้มันยืนในแนวนอนจนกว่าจะตั้งค่า เผาแหวน inoculation บนเปลวไฟของโคมไฟแอลกอฮอล์และรอให้เย็นใช้ของเหลว inoculation ผสมของ staphylococcus aureus และ escherichia coli ถือแผ่น agar ในมือซ้ายและยกฝาขึ้นเล็กน้อยในขณะที่เข้าใกล้เปลวไฟ ถือแหวน inoculation ไว้ทางขวาและขยายลงไปในจาน ทำเส้นอาลักษณ์ในพื้นที่บนจาน แหวน inoculation คือ30-40 ° จากพื้นผิวของแผ่น ค่อยๆสัมผัสมุมและใช้แรงข้อมือของคุณเพื่อเลื่อนเบาๆบนพื้นผิว อย่าขีดข่วนหรือฝังพื้นผิวของแท็บเล็ตลงในฐาน เผาถ้วย inoculation เพื่อฆ่าของเหลวแบคทีเรียที่เหลืออยู่บนแหวน inoculation. หลังจากระบายความร้อนให้ขยายแหวน inoculation ลงในจาน หลังจากสัมผัสกับเส้นที่ข้ามในพื้นที่แรกแล้วให้หมุน90 ° ทั้งสองพื้นที่ยังคงข้าม หลังจากทำเครื่องหมายแล้วให้ inoculation ถ้วยหลังจากระบายความร้อนให้ใช้วิธีเดียวกันในการวาดเส้นในพื้นที่อื่นๆ หลังจากทำเครื่องหมายเส้นทั้งหมดแล้วให้ใช้ดินสอสีพิเศษที่ด้านล่างของจานเพื่อระบุความเครียดวันที่กลุ่มและชื่อ วางจาน petri ทั้งหมดคว่ำและวางไว้ในตู้อบอุณหภูมิคงที่ 37หลังจาก24-48ชั่วโมงของการเพาะปลูกให้นำออกและสังเกต ใส่ใจกับลักษณะของสวิตช์อาณานิคมขนาดสีขอบโครงสร้างพื้นผิวความโปร่งใสฯลฯ.

◾ 、ข้อควรระวัง:

1.ห้องฉีดวัคซีนควรรักษาความสะอาดขัดเคาน์เตอร์และผนังด้วยสบู่เหลวฟีนอล pulverized และ fumigate เป็นประจำด้วยกรดแลคติคหรือฟอร์มาลดีไฮด์ ก่อนการใช้งานแต่ละครั้งควรฆ่าเชื้อด้วยหลอด UV ตรวจสอบความเป็นหมันของห้อง inoculation เป็นประจำ ก่อนที่จะเข้าไปในห้องฉีดวัคซีนควรทำสุขอนามัยส่วนบุคคลก่อนและรองเท้าทำงานหมวกเสื้อผ้าทำงานและหน้ากากควรถูกแทนที่ในห้องบัฟเฟอร์ เสื้อผ้าทำงานรองเท้าทำงานและหน้ากากได้รับอนุญาตให้ใช้ในห้องฉีดวัคซีนเท่านั้น ไม่อนุญาตให้ไปที่อื่นและควรเปลี่ยนและฆ่าเชื้ออย่างสม่ำเสมอ ควรทำเครื่องหมายหลอดทดสอบสามเหลี่ยมและขวดด้วยชื่อและวันที่ของสื่อวัฒนธรรมและความเครียด รายการทั้งหมดที่ย้ายเข้าไปในห้อง inoculation จะต้องเช็ดทำความสะอาดด้วยแอลกอฮอล์70% ในห้องบัฟเฟอร์ ก่อนฉีดวัคซีนฆ่าเชื้อมือทั้งสองข้างด้วยแอลกอฮอล์70% หรือ xinjecieer อย่าปล่อยให้เปลวไฟของโคมไฟแอลกอฮอล์ในระหว่างการดำเนินการ; Tampon ไม่ได้วางแบบสุ่ม; เครื่องมือ inoculation ต้องผ่านการฆ่าเชื้อด้วยเปลวไฟก่อนและหลังการใช้งาน

2.ตู้อบควรทำความสะอาดและฆ่าเชื้อบ่อยๆ